转铁蛋白受体在非小细胞肺癌中的表达及其机制的研究

【摘要】目的：肺癌是当今世界最常见的癌症,其中非小细胞肺癌(NonSmallCellLungCancer,NSCLC)所占比例超过85%。而由于工业化、城镇化、人口老龄化等进程的加快以及不良生活方式和环境污染的持续存在,肺癌形势将愈发严峻,也给肺癌的临床诊治带来了新的挑战与机遇。临床工作中我们注意到许多肺癌患者存在异常铁代谢情况,已有的研究也表明细胞铁过载是促进恶性肿瘤产生的重要原因之一,而转铁蛋白受体(transferrinreceptor,TfR)在细胞铁过载(特别是铁摄入和转运)过程扮演重要作用,因此本研究开创性地着眼于肺癌患者的异常铁代谢情况,从TfR在NSCLC中的表达情况入手,结合有关临床病理资料相对全面系统地分析NSCLC中TfR表达的临床意义,同时国内外首次在细胞层面检测7种不同的常见NSCLC细胞系(A549、H23、PC9、H1299、H520、H125和H460)的TfR表达情况,并探讨TfR在NSCLC细胞增殖生长中可能的作用机制,从而明确TfR在NSCLC中潜在或现实的基础或临床价值。方法：应用免疫组织化学法检测42例NSCLC组织标本和23例正常肺组织标本中TfR蛋白的表达情况,结合有关临床病理资料分析TfR表达情况与NSCLC组织临床病理学特征之间的关系。应用WesternBlot方法进一步测定7种常见经典NSCLC细胞株(A549、H23、PC9、H1299、H520、H125和H60)和正常人支气管上皮细胞株HBE中TfR蛋白的表达水平,选择表达水平最高、最稳定的某一细胞株以转染siRNA干扰技术沉默其TfR基因使TfR表达降低,然后应用WST-8试验和平板克隆形成试验研究TfR表达水平降低对该株细胞增殖生长的影响,并进而推断TfR对该肺癌细胞株增殖生长影响的作用机制。结果：免疫组化检测发现肺组织细胞TfR主要表达定位于细胞膜和细胞浆内膜性结构,以支气管粘膜上皮细胞和肺泡巨噬细胞多见。NSCLC组织TfR阳性表达率为88.10%(37/42),表达积分3.92±2.12,均明显高于正常肺组织[TfR阳性表达率21.74%(5/23),表达积分0.73±1.35](P<0.05)；此外,分析发现NSCLC纠.织TfR表达水平与患者年龄、性别、吸烟史、肿瘤类型、肿瘤分化程度、肿瘤大小及临床分期等临床病理特征均无相关性(P>0.05)。WesternBlot检测发现上述7种NSCLC细胞TfR表达水平较正常肺HBE细胞均升高,其中以H520细胞株TfR表达水平最高、表达最稳定。荧光细胞转染效率约为75.8%,提示H520细胞siRNA转染成功,同时WesternBlot检测证实3个不同的siRNA干扰序列均有效沉默H520细胞TfR基因并明显降低TfR表达,以TfR-homo-2061序列干扰效果最佳；WST-8试验和平板克隆形成试验则表明,TfR表达水平下降对肺癌H520细胞的增殖生长有明显抑制作用。结论：1.NSCLC组织TfR表达水平明显高于正常肺组织,其表达水平与患者年龄、性别、吸烟史、肿瘤病理类型、肿瘤分化程度、肿瘤大小及临床分期均无明显相关性,TfR有望作为一种备选的NSCLC生物学标志物。2.TfR在NSCLC细胞系呈高表达状态,肺鳞癌H520细胞TfR表达水平高于其他6株常见NSCLC细胞株。3.通过成功构建TfR-siRNA瞬时转染真核细胞模型降低TfR表达可以抑制肺鳞癌H520细胞增殖生长,TfR为促进肺鳞癌H520细胞增殖生长的关键因素之一。
【作者】朱洪；
【导师】喻风雷；刘文亮；王翔；
【作者基本信息】中南大学，外科学，2014，博士
【关键词】转铁蛋白受体；非小细胞肺癌；细胞增殖；铁代谢；

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